1 材料與儀器

AL104 萬分之一電子天平( 梅特勒-托利多公 司) ; C18色譜柱( 日本 YMC 公司) ，LC-20A 高效液相 色譜儀( 日本島津公司) ; Ｒ204B3 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器( 上 海申順科技有限公司) ; 超凈工作臺( 蘇州艾克林凈 化設(shè)備有限公司) ; 二氧化碳培養(yǎng)箱( 美國 Thermo 公司) ; 倒置顯微鏡( 日本 Olympus 公司) ; 低速冷凍 離心機( 湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司) ; 酶標(biāo) 儀( 美國 Biotek 公司) ; 數(shù)顯恒溫水浴鍋( 上海齊欣科學(xué)儀器有限公司) ; G2-XS QTof 超高效液相-質(zhì)譜 聯(lián)用儀( 美國 Waters 公司) ; INOVA-600 MHz 高分辨 超導(dǎo)核磁共振譜儀( 瑞士 Bruker 公司) 。常規(guī)提取分離用試 劑甲醇等均為分析純試劑( 長沙匯虹試劑公司) 。

2 方法

取不同品種土牛膝和懷牛膝粉末約 30 g，分別 采用 10、6、4 倍甲醇回流提取三次，每次提取 1 h，提 取液過濾并減壓濃縮和冷凍干燥得醇提取物。精確 稱取各提取物樣品，DMSO 完全溶解( 終體積不得超 過 0． 1% ) 。用完全培養(yǎng)基配制成相應(yīng)濃度的稀釋 液，現(xiàn)配現(xiàn)用，用 0． 22 μm 微孔濾器除菌后測定細 胞毒性和抗炎活性。稱取 25 mg 的 MTT，放入 10 mL 的離心管中，加 5 mL 的 PBS 緩沖液，配成濃度為 5 mg /mL 的 MTT 溶液，超聲完全溶解后用 0． 22 μm 微孔濾器除菌，4 ℃避光保存。取生長狀態(tài)良好，處于對數(shù)生長期的 培養(yǎng) 細 胞，脫 壁 后，用 含 10% 滅活胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基配制成單細胞懸液，用細胞計數(shù)器計 數(shù)，以 3 × 104 個/孔，每孔 100 μL 接種于 96 孔板 中，置于 37 ℃，5% CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。設(shè)空白 組、對照組和樣品組。

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